О журналеКонтактыРедколлегияРедсоветАрхив номеровАвторамРецензентам

Влияние вальпразоламида на ориентировочно-исследовательское поведение мышей

Журнал «Медицина» № 4, 2018, с.109-119 (Исследования)

Авторы

Малыгин А. С.
ординатор, кафедра фармакологии и клинической фармакологии1

Ломоносова И. А.
к.б.н., ассистент, кафедра управления и экономики фармации1

Богомолова О. А.
ассистент, кафедра управления и экономики фармации1

Демидова М. А.
д.м.н., профессор кафедры управления и экономики фармации1

1 - ФГБОУ ВО Тверской государственный медицинский университет Минздрава России, 170100, г. Тверь, улица Советская, дом 4.

Ремарки

Автор для корреспонденции: Ломоносова Ирина Александровна; e-mail: Itabira@yandex.ru. Финансирование: Исследование не имело спонсорской поддержки. Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Аннотация

В экспериментах на мышах исследовано влияние вальпразоламида – нового противоэпилептического средства из группы амидных производных вальпроевой кислоты на ориентировочно-исследовательское поведение в тестах «Открытое поле» и «Темная/светлая камера». В результате эксперимента было выявлено, что новое противоэпилептическое средство вальпразоламид при использовании в дозах 75 мг/кг и 150 мг/кг не оказывало достоверного влияния на ориентировочно-исследовательское поведение мышей. При однократном внутрибрюшинном введении в дозе 300 мг/кг повышались отдельные проявления исследовательской активности грызунов (горизонтальная двигательная активность при тестировании в открытом поле), а в дозе 450 мг/кг оказывалось угнетающее влияние на ориентировочные рефлексы у грызунов.

Ключевые слова

вальпроаты, противоэпилептические средства, ориентировочно-исследовательское поведение

DOI

Введение

Одним из наиболее распространенных и социально значимых неврологических заболеваний является эпилепсия. По данным ВОЗ, во всем мире от него страдает около 50 млн человек, что составляет 0,5-1% населения. В настоящее время известно большое число основных (вальпроаты, карбамазепин, фенитоин, топирамат, леветирацетам) и дополнительных (ретигабин, перампанел, лакосамид и др.) противоэпилептических средств. Особенностью их применения является необходимость длительной, а нередко пожизненной терапии, в связи с чем к препаратам данной группы предъявляют особые требования в отношении безопасности и влияния на качество жизни пациентов. Наиболее часто назначаемыми антиконвульсантами являются вальпроаты, основными показаниями к применению которых являются эпилепсия различных форм (большие и малые приступы, миоклоническая, тонико-клоническая и биполярная формы), а также эпилептический синдром [7,9]. Препараты вальпроевой кислоты обычно хорошо переносятся пациентами, однако при их использовании возможно развитие ряда серьезных неблагоприятных реакций, среди которых наиболее значимыми являются поражение печени и тератогенность. Кроме того, вальпроаты могут оказывать негативное влияние на ЦНС, в том числе снижать скорость психомоторных реакций и мышления, вызывать повышенную сонливость, поведенческие нарушения, изменение настроения, а при использовании в высоких дозах они обладают нейротоксичностью [8]. Экспериментально показано, что в дозах, близких к миорелаксантным, натрия вальпроат оказывает угнетающее влияние на ориентировочные рефлексы у грызунов [3]. В связи с этим важнейшим этапом доклинических испытаний новых противоэпилептических средств является оценка нейротоксичности и исследование влияния на поведенческие реакции подопытных животных.

Цель исследования

Целью настоящего исследования явилась оценка влияния вальпразоламида – нового противоэпилептического средства из группы амидных производных вальпроевой кислоты на ориентировочно-исследовательское поведение грызунов.

Материалы и методы исследования

Объектом исследования явился вальпразоламид (N-(5-Этил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-2-пропилпентанамид), синтезированный в АО "Всероссийский научный центр по изучению безопасности биологически активных веществ" (г. Старая Купавна) проф. С. Я. Скачиловой [5]. По химической структуре вальпразоламид представляет собой амидное производное вальпроевой кислоты и 1,3,4-тиадиазола (рис. 1).

Рис. 1. Химическая структура вальпразоламида (N-(5-этил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-2-пропилпентанамид).

Экспериментальные исследования выполнены с использованием белых аутбредных мышей-самцов SHK массой 19-21 г. Животных содержали при постоянной температуре (22±2°C) и искусственном 12-часовом режиме дня и ночи (светлое время 08:00-20:00) со свободным доступом к воде и пище. Условия содержания подопытных животных соответствовали правилам лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ [6]. Все эксперименты осуществляли в соответствии с методическими рекомендациями по проведению доклинических исследований лекарственных средств [4] с соблюдением "Европейской конвенции о защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях" (Directive 2010/63/EU) при наличии разрешения этического комитета Тверского государственного медицинского университета.

Ориентировочно-исследовательское поведение грызунов изучали в тестах "Открытое поле" и "Темная/светлая камера" [2]. Тестирование проводили в светлое время суток (с 9 до 11 часов утра). Вальпразоламид вводили подопытным мышам внутрибрюшинно за 40 мин до тестирования в дозах 75 мг/кг, 150 мг/кг, 300 мг/кг и 450 мг/кг. При выборе доз вальпразоламида учитывали, что значение DL50 (среднесмертельная доза) при внутрибрюшинном введении мышам составляет 923 мг/кг (95% ДИ 837,9 – 1007,3), значение TD50 (среднетоксическая доза, при использовании которой неврологический дефицит в тесте вращающегося стержня отмечается у 50% животных) равно 452 мг/кг (95% ДИ 363,3 – 548,7), а ED50 (среднетерапевтическая доза, при использовании которой противоэпилептический эффект отмечается у 50% животных) и ED84 при пентилентетразоловых судорогах составляет 63,4 мг/кг (95% ДИ 29,6 – 97,2) и 128 мг/кг соответственно. В связи с тем, что вальпразоламид по химической структуре относится к вальпроатам, в качестве препарата сравнения использовали кислоту вальпроевую в дозе 150 мг/кг (ED50 – среднетерапевтическая доза, при использовании которой противоэпилептическая активность в тесте с подкожным введением пентилентетразола проявляется у 50% животных). Животные группы контроля получали изотонический раствор натрия хлорида.

Наблюдение за подопытными грызунами в установке "Открытое поле" (ООО "НПК Открытая наука", Россия) проводили в течение 5 минут с использованием видеокамеры, подвешенной на штатив над установкой. Установка для тестирования представляла собой круглую арену (диаметром 60 см со стенками высотой 30 см), расчерченную на 3 ряда секторов (центр, прецентральные и периферические) с 13 отверстиями (норками) диаметром 1 см в полу площадки. Подопытное животное помещали в один из секторов периферии площадки и позволяли свободно перемещаться в течение 5 минут при отсутствии экспериментатора в помещении. Анализ паттернов поведения проводили при изучении видеозаписи эксперимента. Регистрировали время нахождения в центральных и периферических секторах, число пересечений центральных и периферических секторов, вертикальных стоек, заглядываний в отверстия, болюсов, груминга и мочеиспусканий [1-2,4]. После каждого животного поверхность "открытого поля" тщательно промывали несколько раз и высушивали. Дополнительно оценивали поведение мышей в тесте "Темная/светлая камера". Данный тест основан на естественном стремлении грызунов избегать ярко освещенных мест. Тестирование осуществляли с использованием установки "Темная/светлая камера" (ООО "НПК Открытая наука", Россия). Подопытных животных помещали в светлый отсек установки, регистрировали число перемещений между отсеками и время нахождения в темном и светлом отсеках камеры в течение 3-х минут наблюдения.

Результаты исследований обрабатывали статистически с применением программного обеспечения "AnalystSoft Inc., BioStat – программа статистического анализа. Версия 2009". Анализ вида распределения количественных признаков и проверку равенства дисперсий проводили с использованием критерия Шапиро-Уилка. Для оценки достоверности различий выборок, имеющих нормальное распределение, применяли параметрический t-критерий Стьюдента и однофакторный дисперсионный анализ ANOVA, в случае ненормального распределения использовали U-тест Манна-Уитни и критерий Краскела-Уоллиса. Для сравнения 2-х относительных показателей, характеризующих частоту определенного признака, использовали точный критерий Фишера. В случаях нормального распределения данные представляли в виде m±SEM (среднее±стандартная ошибка среднего), в случаях ненормального распределения в виде – Me (LQ – UQ) (медиана, 25%-й и 75%-й квартили). За достоверное принимали различие при уровне вероятности 95% и более (p<0,05).

Результаты исследования и их обсуждение

В тесте "Открытое поле" оценивали влияние вальпразоламида на ориентировочно-исследовательскую активность и уровень тревожности мышей в условиях воздействия незначительного стрессового фактора (открытое освещенное пространство, новая обстановка). Основными паттернами, характеризующими ориентировочно-исследовательскую активность грызунов, являются горизонтальная двигательная активность (перемещение по площадке), а также обнюхивание краев и обследование (засовывание головы внутрь отверстий "по глаза") отверстий в полу арены (норковый рефлекс).

Анализ горизонтальной двигательной активности мышей группы контроля показал, что большая часть пересечений секторов (62,4%) приходилась на периферию арены, тогда как в середине (2/3 арены) и в центре арены грызуны совершали соответственно 32,3% и 5,3% пересечений секторов. В сериях опытов с введением вальпроатов большая часть перемещений подопытных животных также приходилась на периферию площадки. Так, было показано, что при однократном внутрибрюшинном введении вальпразоламида в дозах 75 мг/кг, 150 мг/кг и 300 мг/кг на периферии арены грызуны совершали соответственно 70%, 62,2% и 67,5% пересечений секторов, что достоверно не отличалось от уровня горизонтальной активности животных контрольной группы и подопытных мышей, получавших вальпроевую кислоту (150 мг/кг). Одновременно отмечено, что при введении вальпразоламида в дозе 450 мг/кг (TD50 в тесте вращающегося стержня) у подопытных животных отмечалась шаткая, неустойчивая походка, уменьшение общего числа пересеченных секторов в среднем в 2,5 раза (t-критерий Стьюдента, р<0,05) по сравнению с контролем. Большая часть времени (87,9%) и активности (72,8% пересеченных секторов) подопытных животных, получавших вальпразоламид в дозе 450 мг/кг, приходились на периферию площадки (табл. 1).

Таблица 1. Влияние вальпразоламида и вальпроевой кислоты на горизонтальную двигательную активность мышей в тесте "Открытое поле", m±SEM

Разновидностью ориентировочно-исследовательского поведения мышей является "норковый" рефлекс, который свидетельствует о способности животных исследовать открытое поле. Среднее число обследованных отверстий в полу площадки (норок) у мышей группы контроля составило 9,5±1,2. В сериях опытов с введением вальпразоламида (75 мг/кг и 150 мг/кг) и вальпроевой кислоты (150 мг/кг) значение данного показателя достоверно не отличалось от контроля (p<0,05, t-критерий Стьюдента). Одновременно показано, что при введении вальпразоламида в дозе 300 мг/кг исследовательская активность подопытных мышей незначительно повышалась, о чем свидетельствовало увеличение числа обследованных отверстий в среднем в 1,3 раза (p<0,05, t-критерий Стьюдента) по сравнению с контролем, тогда как при введении вальпразоламида в дозе 450 мг/кг исследовательская активность подопытных животных напротив достоверно (p<0,05, t-критерий Стьюдента) угнеталась (в среднем в 2,2 раза) (рис.1).

Полученные данные свидетельствуют о том, что при применении в терапевтических для противосудорожной активности дозах вальпразоламид не изменяет или повышает отдельные проявления исследовательской активности подопытных животных, тогда как в высоких дозах может угнетать ориентировочные рефлексы у грызунов.

Рис.1. Влияние вальпразоламида (75 мг/кг, 150 мг/кг, 300 мг/кг и 450 мг/кг) и вальпроевой кислоты (150 мг/кг) на норковый рефлекс (число обследованных отверстий в полу площадки) у мышей.

Обращает на себя внимание тот факт, что угнетение ориентировочных рефлексов в тесте "Открытого поля" в сериях опытов с вальпразоламидом отмечалось при его введении в дозе, вызывающей неврологический дефицит в тесте вращающегося стержня у 50% животных (450 мг/кг).

Вертикальную двигательную активность грызунов в тесте "Открытого поля" оценивали по числу вертикальных стоек, среди которых выделяли 2 разновидности: Climbing (вертикальные стойки с упором, при которых задние лапы животного остаются на полу арены, а передние упираются в стенку поля) и Rearing (вертикальные стойки без упора, при которых передние лапы остаются на весу). Вертикальные стойки у грызунов являются паттернами, характеризующими их эмоциональную тревожность. Отмечено, что общее число вертикальных стоек в группе контроля составило 25,6±2,3, при этом превалировали стойки с упором (65,6%). Применение вальпразоламида в терапевтических дозах и вальпроевой кислоты не влияло на вертикальную двигательную активность и соответственно на эмоциональную тревожность мышей, так как достоверных изменений общего числа вертикальных стоек и их структуры у подопытных животных, получавших вальпроаты, обнаружено не было. При введении вальпразоламида в дозе 450 мг/кг у подопытных мышей отмечались только стойки с упором, число которых было в среднем в 4,5 раза (p<0,05, t-тест Стьюдента) меньше, чем в контроле, что, вероятно, является проявлением нейротоксичности (табл. 2).

Таблица 2. Влияние вальпразоламида и вальпроевой кислоты на вертикальную двигательную активность у мышей в тесте "Открытое поле", m±SEM

Одним из характерных, стереотипных компонентов поведения грызунов является реакция груминга (чистки шерсти). Эта реакция возникает в ответ на неспецифические раздражители, не связанные с загрязнением животных. Груминг появляется в ситуациях, связанных с действием различных раздражителей или в ситуациях, приводящих к повышению уровня возбуждения животных. Короткий груминг проявляется 1-2 быстрыми круговыми движениями лап вокруг носа и небольшой области около него, а длительный – умыванием области глаз, заведением лап за уши и переходом на умывание всей головы, лап, боков, туловища, аногенитальной области, хвоста. Отмечено, что мыши контрольной группы наиболее часто совершали короткий груминг, однократный длительный груминг отмечался у 83% подопытных животных контрольной группы. В сериях опытов с введением вальпразоламида в дозах 75 мг/кг, 150 мг/кг и 300 мг/кг достоверных изменений частоты короткого и длительного груминга у подопытных мышей обнаружено не было, тогда как при введении вальпразоламида в дозе 450 мг/кг и вальпроевой кислоты в дозе 150 мг/кг отмечалось достоверное уменьшение актов короткого груминга соответственно в 2 раза и 3 раза (p<0,05, U-тест Манна-Уитни) по сравнению с контролем. В серии опытов с введением вальпроевой кислоты уменьшение числа короткого груминга компенсировалась увеличением длительного (p<0,05, U-тест Манна-Уитни) (табл. 3).

Таблица 3. Влияние вальпразоламида и вальпроевой кислоты на частоту груминга и дефекации у мышей в тесте "Открытое поле", Me (LQ – UQ)

Полученные данные подтверждают тот факт, что вальпразоламид в дозе 450 мг/кг (TD50 в тесте вращающегося стержня) оказывает угнетающее влияние на ЦНС. При использовании в терапевтических для противоэпилептической активности дозах новое производное вальпроевой кислоты не оказывает достоверного влияния на частоту груминга и дефекации у грызунов в условиях воздействия на них стрессового фактора в виде открытого освещенного пространства в тесте "Открытого поля".

Влияние вальпразоламида на ориентировочно-исследовательское поведение грызунов оценивали также с использованием установки "Тёмная/светлая камера", состоящей из "безопасного" тёмного и ярко освещённого светлого отсеков с отверстием для перехода из одного отсека в другой. Тест "Темная/светлая камера" основан на врождённом избегании грызунами ярко освещённых мест (норковый рефлекс) и на спонтанном ориентировочно-исследовательском поведении животных. Модель создает конфликтную ситуацию для мыши, которая склонна исследовать незнакомую область, однако, первоначально хочет избежать неизвестного (неофобия). Конфликт создается между естественным ориентировочно-исследовательским поведением и реакцией избегания неизвестного. Установку используют для оценки тревожного поведения грызунов. Интервал времени, проведенного в тёмном отсеке, коррелирует с уровнем тревожности, тогда как число выходов и время обследования освещённого отсека – показатели склонности к риску и исследовательской активности. При низком уровне тревоги увеличивается число переходов между темным и светлым отсеками камеры.

Анализ результатов проведенного исследования показал, что однократное внутрибрюшинное введение вальпразоламида в дозах 75 мг/кг, 150 мг/кг и 300 мг/кг не влияло на уровень тревожности и ориентировочно-исследовательское поведение мышей в тесте "Темная/светлая камера". Об этом свидетельствовало отсутствие достоверных изменений в числе переходов между камерами и времени нахождения грызунов в светлой камере в сериях опытов с введением вальпразоламида в различных дозах (критерий Краскела-Уоллиса, р=0,306). При однократном внутрибрюшинном введении вальпразоламида в дозе 450 мг/кг отмечено достоверное уменьшение времени нахождения подопытных животных в светлой камере и уменьшение числа переходов из камеры в камеру по сравнению с контролем (p<0,05, U-тест Манна-Уитни). (таб.4).

Таблица 4. Число переходов из камеры в камеру и время нахождения мышей в светлой камере (при внутрибрюшинном введении вальпразоламида и вальпроевой кислоты в тесте "Темная/светлая камера", Me (LQ – UQ)

Полученные данные подтверждают сведения о том, что в высоких дозах вальпразоламид так же, как и другие противоэпилептические средства из группы производных вальпроевой кислоты может вызывать угнетение центральной нервной системы.

Выводы

Новое противоэпилептическое средство вальпразоламид при использовании в дозах 75 мг/кг и 150 мг/кг (терапевтические дозы при пентилентетразоловых судорогах) не оказывал достоверного влияния на ориентировочно-исследовательское поведение мышей в тестах "Открытое поле" и "Темная/светлая камера". При однократном внутрибрюшинном введении в дозе 300 мг/кг (терапевтическая доза при судорогах, индуцированных максимальным электрошоком) повышал отдельные проявления исследовательской активности грызунов (горизонтальную двигательную активность при тестировании в открытом поле). Незначительное усиление исследовательской активности подопытных мышей отмечалось также при введении вальпроевой кислоты в дозе, равной ED50 при пентилентетразоловых судорогах (150 мг/кг). Угнетающее влияние на ориентировочные рефлексы у грызунов вальпразоламид оказывал при использовании в дозе, близкой к значению TD50, вызывающей неврологический дефицит в тесте вращающегося стержня у 50% животных (450 мг/кг).

Список литературы

1. Богомолова О.А., Демидова М.А. Влияние новых производных 3-оксипиридина на ориентировочно-исследовательское поведение крыс. Верхневолжский медицинский журнал 2015; 14 (4):33-37.

2. Воронина Т.А., Гарибова Т.Л, Крайнева В.А Поведенческие экспериментальные модели депрессии. Фармакокинетика и фармакодинамика 2017; 3:14-19.

3. Джагацпанян И.А., Пароникян Р.Г., Назарян И.М. Экспериментальная характеристика нейротропного спектра некоторых антиэпилептических препаратов. Экспериментальная и клиническая фармакология 2003; 66 (6): 20-23.

4. Миронов А.Н. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств. М.: Гриф и К., 2012. 944 с.

5. Патент 2651572 Российская Федерация, МПК А 61 К 31/433 N-(5-Этил-1,3,4-тиадиазол-2-ил)-2-пропилпентанамид, обладающий противоэпилептической и обезболивающей активностями. С.Я. Скачилова, А.С.Малыгин, Н.С.Попов [и др.]; заявитель и патентообладатель ОАО ВНЦ БАВ. – № 267288; заявл. 13.03.2018; опубл. 20.11.2018, Бюл. № 32. – 1 с.

6. Приказ МЗ РФ от 01.04.2016 № 199н "Правила надлежащей лабораторной практики"

7. Фрейдкова Н.В., Пылаева О.В., Мухин К.Ю. Вальпарин ХР в лечении эпилепсии (обзор литературы и описание клинических случаев). Русский журнал детской неврологии 2015; 10(3): 37-42.

8. Шнайдер Н.А. Дмитренко Д.В. Хроническая интоксикация вальпроевой кислотой в эпилептологии: диагностика и лечение. Неврология, нейропсихиатрия, психосоматика 2016; 8(2): 94-99.

9. Perucca E. Pharmacological and therapeutic properties of valproate: a summary after 35 years of clinical experience. CNS Drugs 2012; 16 (10): 695-714.

Impact of Valprazolamide on the Exploratory Behavior in Mice

Authors

Malygin A. S.
Resident Physician, Chair for Pharmacology and Clinical Pharmacology1

Lomonosova I. A.
Cand. Biol. Sci. Assistant, Chair for Management and Economic of Pharmacy1

Bogomolova O. A.
Assistant, Chair for Management and Economic of Pharmacy1

Demidova M. A.
Doctor of Medicine, Full Professor, Head, Chair for Management and Economic of Pharmacy1

1 - Tver State Medical University, Tver, Russia

Remarks

Corresponding Author: Lomonosova Irina; e-mail: Itabira@yandex.ru. Conflict of interest: None declared. Funding: The study had no sponsorship.

Abstract

The effect of valprazolamide, a new antiepileptic agent from the group of amide derivatives of valproic acid, on the exploratory behavior of mice in “open field” test and a “dark/light transition” test was studied. As a result of the experiment, it was revealed that the new antiepileptic drug valprazolamide, when used in doses of 75 mg/kg and 150 mg/kg, hadn’t a significant effect on the orienting-exploratory behavior of mice. With a single intraperitoneal injection at a dose of 300 mg/kg, individual manifestations of rodent research activity increased (horizontal locomotor activity when tested in the open field), and at a dose of 450 mg / kg, it had a depressing effect on the orientation reflexes in rodents.

Key words

valproates, antiepileptics, exploratory behavior

DOI

References

1. Bogomolova O.A., Demidova M.A. Vliyaniye novykh proizvodnykh 3-oksipiridina na oriyentirovochno-issledovatel'skoye povedeniye krys [The effect of new 3-hydroxypyridine derivatives on the orienting-exploratory behavior in rats]. Verkhnevolzhskiy meditsinskiy zhurnal [Upper Volga Medical Journal] 2015; 14 (4): S. 33-37. (In Russ.)

2. Voronina T.A., Garibova T.L., Krayneva V.A. Povedencheskiye eksperimental'nyye modeli depressii [Behavioral experimental models of depression]. Farmakokinetika i farmakodinamika [Pharmacokinetics and Pharmacodynamics] 2017; 3: 14-19. (In Russ.)

3. Dzhagatspanyan I.A., Paronikyan R.G., Nazaryan I.M. Eksperimental'naya kharakteristika neyrotropnogo spektra nekotorykh antiepilepticheskikh preparatov [Experimental characterization of the neurotropic spectrum of some anti-epileptic drugs]. Eksperimental'naya i klinicheskaya farmakologiya [Experimental and Clinical Pharmacology] 2003; 66 (6): 20-23. (In Russ.)

4. Mironov A.N. Rukovodstvo po provedeniyu doklinicheskikh issledovaniy lekarstvennykh sredstv [Guidelines for conducting preclinical studies of drugs]. Moscow: Grif i K., 2012. 944 s. (In Russ.)

5. Pat. 2651572 Rossiyskaya Federatsiya, MPK A 61 K 31/433 N- (5-Etil-1,3,4-tiadiazol-2-il) -2-propilpentanamid, obladayushchiy protivoepilepticheskoy i obezbolivayushchey aktivnostyami / S.Ya. Skachilova, A.S.Malygin, N.S.Popov [i dr.]; zayavitel' i patentoobladatel' OAO VNTS BAV. – № 267288; zayavl. 13.03.2018; opubl. 20.11.2018, Byul. № 32. [Patent 2651572, Russian Federation, IPC A 61 K 31/433 N- (5-Ethyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl) -2-propylpentanamide, which has antiepileptic and analgesic activities. S.Y. Skachilova, A.S. Malygin, N.S. Popov [et al.]; applicant and patent holder of JSC VNTS BAV. – № 267288; declare 03/13/2018; publ. 11/20/2018 Bull. No. 32.]

6. Prikaz MZ RF ot 01.04.2016 № 199n "Pravila optimal'noy laboratornoy praktiki" [Order of the Ministry of Health of the Russian Federation of 01.04.2016 No. 199n "Rules of Good Laboratory Practice"] (In Russ.)

7. Freydkova N.V., Pylayeva O.V., Mukhin K.Yu. Val'parin KHR v lechenii epilepsii (obzor literatury i opisaniya klinicheskikh sluchayev) [Valparin KHR in the treatment of epilepsy (review of the literature and description of clinical cases)]. Russkiy zhurnal detskoy nevrologii [Russian Journal of Pediatric Neurology] 2015; 10 (3): 37-42. (In Russ.)

8. Shnayder N.A. Dmitrenko D.V. Khronicheskaya intoksikatsiya val'proyevoy kislotoy v epileptologii: diagnostika i lecheniye [Chronic intoxication with valproic acid in epileptology: diagnosis and treatment]. Nevrologiya, neyropsikhiatriya, psikhosomatika [Neurology, neuropsychiatry, psychosomatics] 2016; 8 (2): 94-99. (In Russ.)

9. Perukka Ye. Farmakologicheskiye i terapevticheskiye svoystva val'proata: rezyume posle 35 let klinicheskogo opyta. CNS Drugs 2012; 16 (10): 695-714.